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純化小技巧 | 脫鹽換液小幫手——Puredex® G-25系列凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)

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Puredex^? G-25是一系列交聯(lián)葡聚糖基架的，凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)，利用不同分子的分子量差異對(duì)其進(jìn)行分離。

層析過(guò)程中，大于凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)孔徑的大分子，沿外水下移，路徑最短，最先被洗脫出來(lái)；分子量中等的物質(zhì)，部分進(jìn)入凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)內(nèi)部，洗脫速度稍慢，后大分子物質(zhì)而出；小分子物質(zhì)則全部進(jìn)入凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)內(nèi)部，洗脫速度最慢，最后被洗脫出來(lái)，故而不同分子量的物質(zhì)被分離開(kāi)來(lái)。

Puredex^? G-25系列由四款不同粒徑的層析介質(zhì)組成，按照顆粒粒徑從大到小排列，分別冠以C（Coarse，粗粒徑）、M（Medium，中等粒徑）、F（Fine，細(xì)粒徑）、SF（Superfine，超細(xì)粒徑）的后綴。該系列層析介質(zhì)通常用于多種生物分子的脫鹽、緩沖液置換，以及小分子物質(zhì)的分離純化，比如：多肽等。

優(yōu)異的放大生產(chǎn)能力

適應(yīng)不同體積樣品的處理需求，容易線性放大。
放大生產(chǎn)穩(wěn)定，已有較多600-800 mm 柱規(guī)模放大生產(chǎn)。

使用小技巧推薦

Puredex? 系列層析介質(zhì)以干粉形式供應(yīng)，在使用前必須在足量的緩沖液中膨脹。有時(shí)也可以通過(guò)使用沸水浴來(lái)加速，沸水浴也可對(duì)緩沖液進(jìn)行除氣。
膨脹后的層析介質(zhì)可以制成勻漿比為75%的混懸液進(jìn)行裝柱。
對(duì)于實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的脫鹽，通常建議選擇較為保守的樣品體積，即低于柱體積的20%。
上樣前需對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾，以除去其中的細(xì)胞碎片或顆粒物質(zhì)。
為了減少或降低可能存在的離子相互作用，在脫鹽過(guò)程中及終樣品緩沖液中可以保持低鹽度（例如：25 mM NaCl）。
當(dāng)緩沖液中不適合NaCl存在時(shí)，有時(shí)可以加入100 mM 醋酸銨或碳酸氫銨等揮發(fā)性溶劑。
如脫鹽柱使用過(guò)多次，且需要去除沉淀的蛋白質(zhì)或其他污染物時(shí)，可以使用2倍柱體積的0.2 M NaOH或非離子洗滌劑（保留60-90 min）。

技術(shù)參數(shù)

* 干粉狀態(tài)下測(cè)量，分布在范圍內(nèi)的百分比≥80%

化學(xué)耐受性

* 層析介質(zhì)在40 ℃，pH 2-13 環(huán)境下放置7天后，其理化性質(zhì)和功能沒(méi)有明顯變化。

應(yīng)用案例

Puredex^? G-25M對(duì)某蛋白樣品進(jìn)行脫鹽

填料：Puredex^? G-25M

層析柱：Chrom-LinX? 26/400 (H=34 cm)

樣品：某蛋白樣品（~750 kD）

樣品體積：20 mL

流速：8 mL/min

緩沖液：10 mM 醋酸-醋酸鈉，pH 6.0

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預(yù)裝柱

除去散裝填料自由裝填高度外，百林科還推出了Chrom-Trap^? 系列預(yù)裝柱，將Puredex^? G-25M凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)裝填在Chrom-Trap^? 預(yù)裝柱中，其內(nèi)徑為16 mm，柱床高度為25 cm，適用于客戶(hù)端樣品的快速制備純化。每一根預(yù)裝柱都經(jīng)過(guò)柱效檢測(cè)，重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)便，可輕松連接至層析設(shè)備。

產(chǎn)品貨號(hào)