細胞培養(yǎng)是一項復(fù)雜且細致的實驗工作，它在生物醫(yī)學(xué)研究中占據(jù)著重要位置。細胞污染是細胞培養(yǎng)中最常見、最棘手的問題，在發(fā)現(xiàn)細胞形態(tài)異常時，一定要及時排查污染并進行處理，否則會給我們的實驗造成極大的影響。細胞污染不僅會影響實驗結(jié)果的準確性，還可能導(dǎo)致實驗的徹底失敗。

處理方法：在培養(yǎng)基中加入抗生素處理，可以用四環(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素，前兩者的工作濃度是50 μg/mL；鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。但是，細胞本身也有影響，狀態(tài)大不如從前，所以，防范于未然，正確操作、嚴格執(zhí)行無菌操作規(guī)范，定期清理消毒。

真菌污染

真菌和酵母是細胞培養(yǎng)中另一類常見的污染源。它們會在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中形成棉狀塊或絲狀物，嚴重影響細胞生長。預(yù)防真菌/酵母污染的方法包括嚴格控制培養(yǎng)室濕度、定期清潔消毒培養(yǎng)器具、避免長時間暴露培養(yǎng)物于空氣中等。

處理方法：一旦發(fā)現(xiàn)真菌污染，建議立即舍棄受污染的細胞，并對整個培養(yǎng)環(huán)境進行徹底的消毒滅菌處理。包括CO2培養(yǎng)箱、器皿和培養(yǎng)液等所有可能被污染的對象。

支原體污染

支原體非常微小，常規(guī)光學(xué)顯微鏡難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)，除菌過濾無法去除。它們附著在細胞表面，導(dǎo)致細胞狀態(tài)變差、生長緩慢。支原體感染不易發(fā)覺，但會嚴重影響細胞實驗的結(jié)果。

處理方法：采用PCR、ELISA等方法定期檢測支原體污染，確保細胞培養(yǎng)環(huán)境的純凈，對于珍貴的細胞，可以考慮使用支原體清除培養(yǎng)基進行處理。這種特殊成分的培養(yǎng)基可以有效清除支原體，減少因污染帶來的損失。

霉菌污染

正常情況下，培養(yǎng)基在 37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩三天，在倒置顯微鏡下仍保持透明，無雜質(zhì)。一旦出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，顯微鏡下可見絲狀和團塊狀漂浮物，菌絲明顯。此時，雖然細胞仍在生長，但它們的生命狀態(tài)會在長時間后逐漸惡化。

處理方法：用硫酸銅溶液擦拭 CO₂ 培養(yǎng)箱，向托盤中加入飽和硫酸銅或消毒后加入飽和磷酸氫二鈉高鹽溶液，避免霉菌污染。

交叉污染

交叉污染是指從一個培養(yǎng)物傳播到另一個培養(yǎng)物的現(xiàn)象，常見于細胞培養(yǎng)物品、器具或操作過程中。為避免交叉污染，可以定期清潔和消毒工作臺、培養(yǎng)箱等設(shè)備，避免混合使用實驗器具?？偟膩碚f，細胞培養(yǎng)中的常見污染種類繁多，控制污染源、加強無菌操作、定期消毒和檢測培養(yǎng)物的純度等措施是預(yù)防污染的關(guān)鍵。及時發(fā)現(xiàn)并處理污染現(xiàn)象，對于確保細胞培養(yǎng)實驗的準確性和可靠性至關(guān)重要。

處理方法：通過STR（短串聯(lián)重復(fù)序列）分析等分子生物學(xué)技術(shù)，定期驗證細胞株的純度，防止交叉污染。

化學(xué)污染

化學(xué)污染主要指培養(yǎng)基、試劑中含有的毒性化學(xué)物質(zhì)，這些物質(zhì)可能來源于不純的試劑、實驗設(shè)備的殘留物等。這些化學(xué)物質(zhì)會影響細胞的正常生長，甚至導(dǎo)致細胞死亡。

處理方法：立即丟棄污染后的培養(yǎng)基并更換新鮮培養(yǎng)基避免擴大污染，清洗細胞容器，養(yǎng)成良好的無菌操作習(xí)慣，避免污染發(fā)生。

防止細胞污染的措施

1. 嚴格的無菌操作

無菌操作是防止微生物污染的關(guān)鍵。實驗人員在進行細胞培養(yǎng)操作時，應(yīng)嚴格遵守?zé)o菌操作規(guī)范：

• 手部消毒：操作前、操作過程中應(yīng)頻繁使用消毒液消毒雙手。

• 使用無菌耗材：培養(yǎng)皿、移液器吸頭、試管等耗材應(yīng)保證無菌。

• 定期清潔工作臺：使用75%乙醇或其他適宜的消毒液擦拭工作臺面，保持工作環(huán)境的清潔。

• 無菌工作臺：在無菌工作臺（如生物安全柜）中進行所有細胞操作，定期對工作臺進行清潔和消毒。按照說明書或操作SOP要求正確使用無菌工作臺。

2. 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量控制

• 使用高質(zhì)量的培養(yǎng)基和試劑：選購經(jīng)過嚴格質(zhì)量控制的培養(yǎng)基和試劑，避免使用來源不明或儲存時間過長的試劑。并且需要對血清進行常規(guī)污染檢測，以及良好的分裝習(xí)慣和體系。

• 培養(yǎng)基的無菌過濾和存儲：制備培養(yǎng)基時應(yīng)進行無菌過濾，去除可能存在的微生物，無菌過濾后可使用百林科BioHub? 的一次性儲液瓶進行儲液。

百林科BioHub^? 一次性儲液瓶

• 分裝管理：培養(yǎng)基和試劑應(yīng)盡量小批量分裝，避免重復(fù)開封導(dǎo)致的污染。所有分裝使用或備用的試劑（如血清、胰酶）都應(yīng)記錄批次號。

3. 細胞處理

• 細胞分離：不同細胞株應(yīng)在不同的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，避免交叉污染。

• 冷凍和復(fù)蘇：細胞冷凍和復(fù)蘇過程中要嚴格遵守操作規(guī)程，確保細胞存儲和處理過程中的無菌性。

4. 良好的實驗室管理

• 定期監(jiān)測實驗室環(huán)境：通過定期的環(huán)境監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)并處理潛在的污染源。

• 獨立的實驗區(qū)：將細胞培養(yǎng)區(qū)與其他實驗區(qū)分開，避免交叉污染。

• 分開存放細胞株：不同細胞株應(yīng)盡量分開培養(yǎng)和儲存，避免交叉污染。

5. 設(shè)備的定期維護

• 培養(yǎng)箱的定期清潔和消毒：定期對培養(yǎng)箱進行清潔和消毒，防止微生物滋生。

• 顯微鏡和移液器的清潔：實驗結(jié)束后，應(yīng)及時清潔和消毒顯微鏡、移液器等設(shè)備，避免殘留物積累。

6. 培訓(xùn)和規(guī)范操作

• 操作人員培訓(xùn)：定期對實驗人員進行無菌操作培訓(xùn)，確保其掌握正確的操作技巧和無菌觀念。

• 操作規(guī)程：建立并嚴格執(zhí)行實驗室操作規(guī)程，確保每個環(huán)節(jié)都符合無菌操作標準。

• 實驗記錄：詳細記錄每次操作的步驟和結(jié)果，及時發(fā)現(xiàn)和糾正操作中的問題。

總的來說，面對細胞培養(yǎng)中的污染問題，雖然有一系列處理方法可以嘗試挽救受污染的細胞，但最重要的還是采取有效的預(yù)防措施，避免污染的發(fā)生。通過加強實驗室管理、提升操作技能、使用優(yōu)質(zhì)試劑材料和耗材（無菌一次性耗材）以及建立嚴格的質(zhì)控體系，可以大大降低細胞污染的風(fēng)險，保障實驗的順利進行。

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