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從 T 細(xì)胞激活到純化：多糖疫苗蛋白載體技術(shù)干貨

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由于對(duì)多糖的免疫反應(yīng)不足，因而針對(duì)多糖包裹病原體的疫苗的開(kāi)發(fā)頗具挑戰(zhàn)性。特別是在幼兒中，多糖疫苗只能引起 b 細(xì)胞反應(yīng)，所以雖然產(chǎn)生了抗體，但沒(méi)有長(zhǎng)期的記憶，重復(fù)使用的劑量似乎并不有益，而且可能導(dǎo)致抗體濃度低于初次免疫后的抗體濃度。通過(guò)與蛋白載體結(jié)合，已經(jīng)克服了多糖疫苗缺乏 t 細(xì)胞反應(yīng)的問(wèn)題。這引發(fā)了 t 細(xì)胞反應(yīng)，產(chǎn)生抗體和免疫記憶。

雖然作用機(jī)制尚不完全清楚，但多糖結(jié)合疫苗比普通多糖有幾個(gè)優(yōu)勢(shì)：

b 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫疫苗
誘導(dǎo)更高的抗體濃度，產(chǎn)生更長(zhǎng)的時(shí)間
對(duì)幼兒的高免疫原性
重復(fù)劑量增強(qiáng)免疫反應(yīng)而不引起低反應(yīng)性
載體蛋白可誘導(dǎo)對(duì)自身的免疫反應(yīng)，因此結(jié)合疫苗可能誘導(dǎo)對(duì)載體蛋白來(lái)源的病原體的免疫

目前常見(jiàn)的載體蛋白主要包含（破傷風(fēng)毒素（tetanus toxoid TT）, 白喉毒素（diphtheria toxin, DT）,白喉無(wú)毒突變體CRM197 ,流感嗜血桿菌蛋白D（Protein DD,PD ）。

本文總結(jié)了以下4種載體蛋白的純化方案：

1.破傷風(fēng)毒素（tetanus, toxoid TT）

破傷風(fēng)類毒素（TT）由破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)生的神經(jīng)蛋白質(zhì)毒素脫毒獲得分子量150 kD。

圖片4.jpg

2.白喉毒素（diphtheria toxin, DT）

由白喉毒素（diphtheria toxin, DT）脫毒獲得是由感染了 ? 噬菌體的白喉?xiàng)U狀菌產(chǎn)生的細(xì)菌外毒素分子量58 kD。

圖片1更新.jpg

3.白喉無(wú)毒突變體CRM197

作為無(wú)細(xì)胞百白破和結(jié)合疫苗中的載體被廣泛應(yīng)用。

美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市的Prevnar 和 Prevnar 13肺炎疫苗使用的蛋白載體即為CRM197。

由于天然CRM197產(chǎn)量較低，制約了產(chǎn)業(yè)化，也是該疫苗價(jià)格昂貴的原因之一。

圖片2更新.jpg

案例1：

Q Chromstar^? FF 預(yù)裝層析柱，CV:4.7mL

表1更新.jpg

圖片5.png

圖片6.png

小結(jié)：第一步陰離子層析采用0.15M NaCl洗脫可得到較純的樣品。

案例2：

MaXtar^? Phenyl HR 預(yù)裝層析柱，CV:4.7mL

表2更新1111.jpg

圖片7.png 圖片8.png

小結(jié):經(jīng)過(guò)陰離子層析后的樣品再經(jīng)過(guò)疏水層析后樣品純度可達(dá)到95%以上。

4.流感嗜血桿菌蛋白D（Protein D,PD ）

流感嗜血桿菌蛋白D（Protein D,PD ）是高度保守的表面脂蛋白。

存在于所有可分型Hi、不可分型Hi（NTHi），是一種具有甘油磷脂二酯酶活性的細(xì)菌毒力因子，能導(dǎo)致宿主上皮細(xì)胞釋放磷酸膽堿在Hi引起呼吸道感染過(guò)程中起重要作用，分子量42 kD。

圖片3.jpg

綜上，百林科在載體蛋白項(xiàng)目的純化上積累了豐富的工藝開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn)。作為生物工藝核心設(shè)備與關(guān)鍵耗材整體解決方案供應(yīng)商，我們不僅提供層析介質(zhì)，也提供相應(yīng)的層析設(shè)備及層析柱，超濾系統(tǒng)以及其他相關(guān)產(chǎn)品。此外，我們誠(chéng)摯歡迎大家咨詢更多產(chǎn)品線信息。我們技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)可以全程協(xié)助大家做工藝開(kāi)發(fā)與優(yōu)化服務(wù)，以及協(xié)助大家項(xiàng)目轉(zhuǎn)移等橋接服務(wù)。

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