近20-30年，生物技術(shù)在中國取得了巨大進展，生物制藥也越來越被重視。生物制藥的重要原材料是支撐整個產(chǎn)業(yè)鏈的基礎(chǔ)，其質(zhì)量、穩(wěn)定性和供應(yīng)能力直接影響藥物的研發(fā)、生產(chǎn)效率和成本。其中，層析介質(zhì)作為生物制藥的重要原材料，對于實現(xiàn)生物制品的純度、有效性以及安全性都非常重要，需要對其進行足夠的控制以實現(xiàn)工藝性能和產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。

在生物分離純化的過程中，通過層析介質(zhì)的分離純化得到目標產(chǎn)品，但同時相應(yīng)的雜質(zhì)也在層析介質(zhì)中堆積。層析介質(zhì)壽命的界定通常指在特定工藝條件下，從開始使用到使用時與設(shè)定的工藝指標發(fā)生偏差的使用次數(shù)。通過動態(tài)結(jié)合載量、宿主蛋白、核酸、脂類，培養(yǎng)過程的代謝產(chǎn)物、內(nèi)毒素等指標進行判定。

壽命驗證的必要性

1. 成本控制：單次填料成本高達數(shù)十萬元，延長壽命可顯著降本

2. 工藝穩(wěn)健性：驗證可確保填料性能衰減在可控范圍內(nèi)

3. 合規(guī)要求：符合GMP、FDA/EMA對關(guān)鍵耗材的驗證要求

首先，建立層析步驟的縮小模型，然后進行對應(yīng)的縮小模型實驗驗證?？s小模型的建立基于層析比例縮放原則，保持同樣的柱高、線性流速、上樣載量、清洗和洗脫體積、柱效。模型的確認需要三次重復(fù)運行，并對實驗室、中試和生產(chǎn)的性能參數(shù)平均值做作比較。數(shù)據(jù)顯示，在不同規(guī)模性能下， 參數(shù)沒有顯著差異?？s小模型可以完整代表生產(chǎn)規(guī)模，適用于工藝表征研究。

縮小模型及層析介質(zhì)的壽命和清潔驗證可以同步進行。通過雜質(zhì)殘留、收率、肉毒素等檢項判斷，是否符合對應(yīng)標準，是否符合對應(yīng)縮小模型效價?？s小模型的建立及確認對大規(guī)模的層析有指導(dǎo)作用。

1. 再生 恢復(fù)介質(zhì)原有功能，在每個層析循環(huán)之后進行，根據(jù)介質(zhì)的不同選擇不同的緩沖液，如離子介質(zhì)一般選擇2M NaCl，疏水介質(zhì)一般選擇純化水或低濃度的緩沖液。

2. CIP 去除再生過程中不能去除的雜質(zhì)，防止污染物的積累，通常1-10循環(huán)進行一次，不同的層析介質(zhì)根據(jù)對應(yīng)的產(chǎn)品說明書選擇合適的緩沖液。

3. 消毒 去除層析介質(zhì)中的微生物，每批次的物料之間都要對介質(zhì)進行消毒處理。一般的消毒方式是使用0.5-1M的NaOH 30-60min，部分不耐受NaOH的介質(zhì)用其他方式進行消毒。目的是防止微生物的生長和去除內(nèi)毒素。

4. 保存 防止微生物和內(nèi)毒素對介質(zhì)的污染，用在非連續(xù)生產(chǎn)之間，根據(jù)介質(zhì)的性質(zhì)選擇不同的緩沖液，一般為20%的乙醇或者0.01M NaOH。保存對介質(zhì)壽命具有重要的作用。

介質(zhì)清洗不同污染物對應(yīng)不同的清洗方式，其中污染物主要包括可溶性雜蛋白、固化的蛋白、疏水性蛋白、脂類、核酸、色素、內(nèi)毒素及微生物。

在介質(zhì)清洗驗證的過程中會加入空白對照檢驗清洗是否徹底。選擇平衡緩沖液替代樣品進行上樣，收集對應(yīng)的緩沖液。通過對收集液雜質(zhì)殘留，濃度等檢相的檢測判定清洗過程是否符合標準?？瞻讓φ湛梢詸z測清洗驗證及防止雜質(zhì)的持續(xù)累積。

百林科親和填料

MaXtar^? Protein A壽命驗證